冻存培养基比例，武汉普诺赛生命科

冻存培养基比例，武汉普诺赛生命科

使用不同的冻存培养基，细胞冻存是细胞培养、引种、保种和保证实验顺利进行的重要技术手段。在细胞建株和建系中，及时冻存原始细胞是十分重要的。在杂交瘤单克隆抗体的制备过程中，杂交瘤细胞、每次克隆化得到的亚克隆细胞的冻存保种常常是必不可少的实验操作。因为在没有建立一个稳定的细胞系或稳定分泌抗体的细胞系的时候，细胞的培养过程中随时可能因细胞的污染、分泌抗体能力的丧失或遗传变异等等导致实验失败，如果没有原始细胞的冻存，则因为上述的意外而前功尽弃上海完全培养基和细胞冻存液比例注意事项

1、用移液器吸走原培养基，加入适量PBS洗1-2遍;

2、加入适量胰酶，置于培养箱中消化;

3、待消化到位后加入适量血清或完全培养基终止消化，800-1000rpm离心3-5min;

4、配制冻存液，待细胞离心后去上清，加入冻存液重悬，转移到冻存管中;

5、将冻存管放入程序降温盒中，-80度过夜，然后转移到液氮中保存。

6、冻存步骤中包含了消化的大部分步骤，注意细节相同，具体可以参考细胞培养基础篇-传代-丁香园**注意细节：

7、冻存液常规配比为培养基：血清：DMSO=如果细胞比较珍贵，可以调整为血清：DMSO=1;

8、如果没有程序降温盒，可以将冻存细胞依次放于4度1h，-20度2h，-80过夜，大部分细胞也可以适应，但原代细胞不建议这么处理;

9、冻存细胞储存在-80度中通常不建议超过半年，液氮中通常不建议超过2年;

10、细胞如果是,次养，建议至少冻存两个批次以上，以尽量避免因为冻存问题导致细胞绝种;

冻存培养基比例

1、在37°C水浴中快速解冻，持续温和的在水中晃动冻存管，直到剩余少量细胞还处于结冰状态。

2、水浴中取出冻存管，用70%的酒精或异丙醇擦拭除菌。

3、用2mL的血清移液管把细胞悬液转移到一个15mL的锥形试管。

4、注意：用2mL的血清移液管代替1mL的***头可以减少细胞聚集体的分解。武汉怎么配制细胞冻存液怎么样细胞冻存液一般有两种配置方法是什么？

冻存培养基比例

1、了解一级菌种培养基配制的原则;

2、掌握一级菌种培养基配制的,流程;

3、学会一级菌种培养基配制的具体方法步骤;

4、学会棉塞的制作方法和手提式高压蒸汽锅的使用方法。

1、手提式高压锅

2、实验目的了解一级菌种培养基配制的原则;掌握一级菌种培养基配制的,流程;学会一级菌种培养基配制的具体方法步骤;学会棉塞的制作方法和手提式高压蒸汽锅的使用方法。二、实验设备、工具和材料手提式高压锅、1000～1500W电炉、感量1／10g的粗天平、1000mL量杯、玻璃漏斗、漏斗架

3、厌氧菌在有氧的情况下不能生长。要培养厌氧菌，必须创造一个无氧的环境。通常用培养基中加入还原剂，或用物理、化学方法去除环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。厌氧缸法接种好标本的平板或液体培养基试管

冻存dmso和培养基的比例

1、配置细胞冻存液：冻存液应该提前配制，置于室温备用，防止临时配制产生的热量损伤细胞，按无血清培养基比血清比DMSO=1的比例配置细胞冻存液，其中加大冻存液中血清的比例对于保存某些脆弱的干细胞以及一些比较珍贵的细胞很有好处的。按比例加好冻存液组分后，轻轻吸打混匀，置于室温下待用。

1、从细胞培养箱中取出细胞，进行瓶口消毒，弃去细胞原来的培养基。按每25平方厘米1毫升胰酶/EDTA消化液比例加入消化液，放入显微镜下观察，待所有细胞变圆后立即拿入超净台内，加入两毫升细胞完全培养基以立即终止消化。

2、采用无菌枪头轻轻吹打细胞表面，注意吹打全部培养表面，可以按照先左右吹打，后上下吹打的方式，取所有细胞悬液放入一干净的15毫升离心管内。

3、配平离心：采用天平配平两端，每分钟800转，室温离心5分钟。三、细胞计数采用罗氏CASY-DT快速细胞计数及活率分析仪进行细胞计数。

4、加入10毫升CASY-ton至以标记viable的管子中，加入100微升细胞悬液，颠倒混匀三次，可进行细胞计数。